１资料与方法
１．１一般资料
选取福建医科大学附属漳州市医院儿科２０１２年４月至２０１４年２月经骨髓形态学、病理细胞学以及流式细胞术免疫学分型等检查确诊的ＡＬＬ患儿３９例，年龄１～１０岁，平均（５．７±１．１）岁；另取本院同期健康体检儿童３０例作为对照组，年龄１～１２岁，平均（５．２±２．７）岁。化疗１个疗程后，根据治疗结果将患儿组分为完全缓解组、部分缓解组及未缓解组，以各组研究对象的空腹血清作为检测标本，标本采取时间分别为患儿组初次化疗前及化疗１个疗程后，健康对照组标本采取时间为体检时。患儿ＡＬＬ的诊疗标准均按照２００６年中华医学会儿科学分会血液学组制定的儿童ＡＬＬ诊疗建议进行。上述所有研究对象均排除其他肿瘤性疾病、传染性疾病以及炎性疾病。
１．２仪器与试剂
试验所使用的主要仪器为化学发光数字成像分析仪，试剂是ｓＴＫ１诊断试剂，均购自华瑞同康生物技术（深圳）有限公司。根据试剂盒说明书，以２ｐｍｏｌ／Ｌ作为ｓＴＫ１的水平临界值，ｓＴＫ１＞２ｐｍｏｌ／Ｌ即为检出阳性。
１．３方法
采用真空干燥管抽取空腹静脉血３～５ｍＬ，在２ｈ内以３０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，分离血清，将血清分装于干燥离心管内，保存于－２０℃备检。标本收集完后，以试剂盒中的标准品为参照，在标准曲线ｒ≥０．９５的情况下进行测定，严格参照试剂盒提供的操作说明进行。
１．４统计学处理
采用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ５．０软件进行数据处理及统计学分析，计量资料采用ｘ±ｓ表示，组间比较采用ｔ检验；以α＝０．０５为检验水准，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
２结果
２．１各组ｓＴＫ１浓度比较
患儿组化疗前的ｓＴＫ１值明显高于化疗后的完全缓解组、部分缓解组及对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；完全缓解组与部分缓解组及未缓解组的ｓＴＫ１水平差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；未缓解组ｓＴＫ１水平也明显高于部分缓解组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；未缓解组与化疗前组的ｓＴＫ１水平差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。
２．２化疗前、化疗后及对照组血清ｓＴＫ１阳性检出率
患儿组化疗前阳性率明显高于化疗后及对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；患儿组化疗后阳性率也明显高于对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。
３讨论
白血病是常见的血液恶性肿瘤，我国每年有２万例左右儿童白血病发生，在儿童白血病发病率中又以ＡＬＬ为主。ＡＬＬ是一种异质性疾病，表现为原幼淋巴细胞在造血组织中恶性增殖和克隆。近年来，随着免疫学、分子生物学及细胞遗传学的发展，人类深入了解了儿童ＡＬＬ病因和发病机制，在诊断、治疗上得到了长足的进步，使得大多数ＡＬＬ患儿经化疗后都能得到缓解。近年儿童ＡＬＬ的无病生存率（ＥＦＳ）已达８０％以上。但在临床上，对于儿童ＡＬＬ的诊断、化疗疗效观察及预后监测，目前还是缺乏可靠的血清学检测指标，仍依赖于骨髓形态学、细胞病理检查最终确定。骨髓穿刺是一种具有创伤性的标本采集手段，对患儿的身心造成一定的影响，特别是对儿童本身及其家属带来很大的心理生理负担。是否有一种血清学检测指标能对儿童ＡＬＬ进行初筛、辅助诊断、疗效观察及预后监测，减少骨髓穿刺进行细胞病理检查次数，成为目前不断研究探索的方向。ＴＫ是调控ＤＮＡ合成的关键酶之一，在ＡＴＰ为供体及镁离子（Ｍｇ２＋）参与的条件下，催化胸苷磷酸（Ｔｈｄ）为胸苷一磷酸（ＴＭＰ），是胸腺嘧啶核苷进入ＤＮＡ代谢，参与合成ＤＮＡ的唯一途径。ＴＫ的两种同工酶分别为ＴＫ１和线粒体胸苷激酶（ＴＫ２），ＴＫ１主要存在于细胞质中［３］。ＴＫ１是细胞周期依赖性标志物，在细胞内的表达水平与细胞周期有关，细胞分裂Ｇ１期含量比较低，在Ｇ１期到Ｓ期交界处逐渐升高，至Ｓ期达到最高，其高水平持续在Ｓ期到Ｇ２期，至Ｍ期才开始降解［４］。肿瘤细胞的增殖不同于正常细胞，其增殖不受凋亡调控，ＤＮＡ复制循环加速，当组织中Ｓ期细胞比例升高，大量肿瘤细胞在Ｓ／Ｇ２期死亡，高浓度的ＴＫ１释放到外周血，引起体内ＴＫ１升高。正常细胞在Ｇ１期死亡，此时细胞中ＴＫ１浓度很低，释放到外周血的ＴＫ１浓度极微［５］。ＴＫ１是一种新兴的肿瘤细胞增殖标志物，大量研究表明，血清ｓＴＫ１浓度检测在鼻咽癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、宫颈癌、肝癌等实体癌症的辅助诊断、疗效评估、病情监测及预后判断都具有临床意义［６－８］。但对ＴＫ１在血液肿瘤的治疗评估中应用研究最早的是ＴＫ１活性检测。Ｇｒｏｎｏｗｉｔｚ等［９］通过大量临床试验证明ＴＫ１活性不仅可用于血液肿瘤的早期诊断，并可提示化疗疗效及预测疾病预后，与已知的肿瘤特异性标志物结合提高诊断敏感性方面也有很大价值。
徐卫等［１０］发现ＡＬＬ患者ｓＴＫ１表达水平与ＡＬＬ其他预后因素相关，在ＡＬＬ的预后中具有重要价值。ＴＫ１活性检测主要采用放射免疫法，由于放免法存在放射性污染，技术要求比较高，难于在临床上推广。Ｈｅ等［１１］采用免疫印迹增强化学发光法检测ｓＴＫ１浓度，发现ｓＴＫ１浓度对于白血病化疗效果的评估及临床化疗方案的调整也具有重要的临床意义。曾智杰等［１２］研究表明ｓＴＫ１的浓度可用于血液肿瘤化疗效果的评估，以及指导临床进行化疗方案的调整。ｓＴＫ１浓度检测在血液病临床诊治中的价值也得到重视，但目前相对研究还是较少。本研究以儿童ＡＬＬ患儿为研究对象，并以健康体检儿童作为对照组，对患儿组化疗前及化疗后（完全缓解组、部分缓解组、未缓解组）血清和对照组血清进行ｓＴＫ１浓度检测，对各组的ｓＴＫ１浓度及阳性率进行比较。试验结果显示，患儿组化疗前ｓＴＫ１浓度为（４．００±１．３９）ｐｍｏｌ／Ｌ，阳性率为８７．１％；对照组ｓＴＫ１浓度为（０．６７±０．４３）ｐｍｏｌ／Ｌ，阳性率为３．４％，患儿组化疗前的ｓＴＫ１浓度及阳性率明显高于对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１），说明了ＡＬＬ患儿骨髓造血干细胞的恶性增殖，白血病细胞在骨髓和其他造血组织中大量增生，白血病细胞中的ＴＫ１大量释放进入血液中，导致血液中ＴＫ１浓度升高。提示ｓＴＫ１可作为儿童ＡＬＬ的筛查、辅助诊断的血清学标志物。本研究同时对化疗１个疗程后的３９例研究对象根据疗效结果分为完全缓解组（１９例）、部分缓解组（１４例）、未缓解组（６例），完全缓解组的ｓＴＫ１浓度为（１．０５±０．３１）ｐｍｏｌ／Ｌ，部分缓解组的ｓＴＫ１浓度为（１．７８±０．３９）ｐｍｏｌ／Ｌ，未缓解组的ｓＴＫ１浓度为（３．５６±０．６４）ｐｍｏｌ／Ｌ，３组间两两比较，ｓＴＫ１水平差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０１），同时化疗前ｓＴＫ１浓度也明显高于完全缓解组及部分缓解组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１），但化疗前ｓＴＫ１浓度与未缓解组差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。这提示着儿童ＡＬＬ在有效的化疗之后，完全缓解及部分缓解的患儿骨髓中造血干细胞异常增殖被不同程度地有效抑制，白血病细胞在造血组织中大量减少，血液中ｓＴＫ１浓度降低，在骨髓细胞病理学的疗效判断标准中，完全缓解患儿骨髓中的原幼淋巴细胞降至５％以下，部分缓解组的患儿骨髓内的原幼淋巴细胞降至５％至２０％，可以发现ｓＴＫ１浓度结果与ＡＬＬ疗效判断标准中骨髓细胞病理学检查结果是相符的。从ｓＴＫ１检出阳性率结果也显示，化疗后的阳性率（２０．５％）与化疗前的阳性率（８７．１％）差异有统计学意义。综上所述，ｓＴＫ１浓度对于儿童ＡＬＬ的疗效监测及指导治疗方案的调整具有重要意义。
本研究初步表明，ｓＴＫ１浓度作为儿童ＡＬＬ的初筛、辅助诊断具有一定的参考价值，并在儿童化疗疗效评估上也具有重要临床意义。但本研究病例有限，缺少良性疾病的对照，研究结论有一定局限性，今后应通过增加病例及良性病种的深入研究，探讨ｓＴＫ１在临床上的价值。
作者：徐文鑫 梅序桥 刘慧丽 单位：漳州卫生职业学院
